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                                                      低温生物的保藏法你了解多少？

保藏可按微生物各分支学科的***性质分为普通﹑工业﹑农业﹑***﹑兽医﹑等保藏管理中心。此外﹐也可按微生物类群进行分工﹐如沙门氏菌﹑弧菌﹑根瘤菌﹑乳酸菌﹑酵母菌﹑丝状***﹑藻类等保藏中心。

世界上约有 550个保藏机构。其中有美国典型保藏中心(简称ATCC﹐马里兰)﹕1925年建立﹐是世界上大的﹑保存微生物种类和数量多的机构﹐保存病毒﹑衣原体﹑***﹑酵母菌﹑***﹑藻类﹑原生动物等约 29000株﹐都是典型株﹔荷兰***保藏中心(简称CBS﹐得福特):1904年建立﹐保存酵母菌﹑丝状***约 8400种﹑18000株﹐大多是模式株﹔英国***保藏中心(简称NCTC﹐伦敦)﹕保存兽用病原微生物约2740株﹔英联邦***研究所(简称CMI﹐萨里郡)﹕保存***模式株﹑生理生化和有机合成等2763种﹐8000株﹔日本大阪发酵研究所(简称IFO﹐大阪):保存普通和工业微生物约9000株﹔美国相关部北方利用研究开发部(北方地区研究室﹐简称NRRL﹐伊利诺伊州皮契里亚)﹕收藏农业﹑工业﹑微生物分类学所涉及的﹐包括***5000株﹐丝状***1700株﹑酵母菌6000。

低温生物的复壮措施

① 纯种分离。采用平板划线分离法、稀释平板法或涂布法均可。把仍保持原有典型优良性状的单细胞分离出来，经扩大培养***原菌株的典型优良性状，若能进行性能测定则更好。还可用显微镜操纵器将生长良好的单细胞或单孢子分离出来，经培养***原菌株性状。

② 通过寄主体内生长进行复壮(如Bacillus thuringiensis的复壮)。主要是对一些寄生性的菌株，可以将衰的菌株接种到相应的宿主体内，提高其寄生性能及其它性能。

③ 淘汰已衰的个体(采用比较激烈的理化条件进行处理，以杀生命力较差的已衰个体)。可以采用各种外界不良理化条件,使发生衰的个体死去,从而留下群体中生长健壮的个体.如:对'5406'抗生菌的分生孢子进行-30-10度的低温处理5-7天,使80%死去,在抗低温个体中可找到健壮的个体.

④ 采用有效的保藏方法。

低温生物***纯化方法

1、倾注平板法

首先把微生物悬液通过一系列稀释，取一定量的稀释液与熔化好的保持在40~50°左右的营养琼脂培养基充分混合，然后把这混合液倾注到无菌的培养皿中，待凝固之后，把这平板倒置在恒箱中培养。单一细胞经过多次增殖后形成一个菌落，取单个菌落制成悬液，重复上述步骤数次，便可得到纯培养物 2、涂布平板法

首先把微生物悬液通过适当的稀释，取一定量的稀释液放在无菌的已经凝固的营养琼脂平板上，然后用无菌的玻璃刀把稀释液均匀地涂布在培养基表面上，经恒温培养便可以得到单个菌落。3、平板划线法

简单的分离微生物的方法是平板划线法。用无菌的接种环取培养物少许在平板上进行划线。划线的方法很多，常见的比较容易出现单个菌落的划线方法有斜线法、曲线法、方格法、四格法等。当接种环在培养基表面上往后移动时，接种环上的菌液逐渐稀释，然后在所划的线上分散着单个细胞，经培养，每一个细胞长成一个菌落。

2、富集培养法

富集培养法的方法和原理非常简单。我们可以创造一些条件只让所需的微生物生长，在这些条件下，所需要的微生物能有效地与其他微生物进行竞争，在生长能力方面远远超过其他微生物。所创造的条件包括选择合适的碳源、能源、温度、光、pH、渗透压和氢受体等。在相同的培养基和培养条件下，经过多次重复移种，然后富集的菌株很容易在固体培养基上长出单菌落。如果要分离一些专性寄生菌，就必须把样品接种到相应敏感宿主细胞群体中，使其大量生长。通过多次重复移种便可以得到纯的寄生菌。