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生物有机肥产品生产安全性分析

虽然目前生物有机肥产品生产大多采用植物根际促生菌， 但近年来很多研究发现，芽孢菌属和类芽孢菌个别菌株能产生菌素。 即便在安全分级目录中列为一级免做理学试验的， 如枯草芽孢菌、 多类芽孢菌、 地衣芽孢菌等个别菌株也检测到部分溶血素***， 潜在危害不容忽视。 因此， 开展生物有机肥产品生产生物安全风险评价， 从源头上把好安全关是产品质量安全的首要保障。通过调研发现， 用于生物有机肥产品的部分生产分类地位不明确， 甚至混乱， 难以从源头上进行安全风险的初步识别 。 以常见生产枯草芽孢菌为例， 实际上是一个表型相似的群体， 包括枯草芽孢菌、 地衣芽孢菌、 短小芽孢菌、解淀粉芽孢菌、 深褐 （萎缩） 芽孢菌、莫哈韦（莫杰夫） 芽孢菌、 死谷芽孢菌、 索诺拉沙漠芽孢菌、 特基拉芽孢菌、暹罗芽孢菌等 10个缘种。生产企业送检的枯草芽孢菌生物有机肥产品， 经鉴定发现很多产品实际为解淀粉芽孢菌， 且许多菌株具有很强的溶血作用。通过对生产企业调研发现， 部分生产企业选择分离于动物肠道的解淀粉芽孢菌作为产品生产用菌株， 该类生产发酵周期短、 活菌数量高、 生产成本低， 但产品的应用***不佳， 溶血风险大 ， 建议慎用。而植物来源的解淀粉芽孢菌溶血风险小， 产品应用效果好， 推荐使用。

低温生物的寄主分离法

即从生长有某种***的寄主体上(如茯苓、木耳木段)取下木片，进行分离的方法。如木耳制种时，可选朵大、出耳多、质厚的耳棒(即长有木耳的木段)。采集后，削去耳根下的树皮，将其横断面锯成1 厘米厚的木片，在无菌条件下，切去无耳菌丝部分，留下有耳菌丝部分，浸入0 . 1 %水中1 分钟，取出再用无菌水冲去木片上的液。然后，用解剖刀将木片切成0 . 5 厘米的小块，放入斜面培养基内，置24 ~26 ℃下培养，及时淘汰杂菌，选取纯菌丝进行移植培养，即得。

低温生物***纯化方法

1、倾注平板法

首先把微生物悬液通过一系列稀释，取一定量的稀释液与熔化好的保持在40~50°左右的营养琼脂培养基充分混合，然后把这混合液倾注到无菌的培养皿中，待凝固之后，把这平板倒置在恒箱中培养。单一细胞经过多次增殖后形成一个菌落，取单个菌落制成悬液，重复上述步骤数次，便可得到纯培养物 2、涂布平板法

首先把微生物悬液通过适当的稀释，取一定量的稀释液放在无菌的已经凝固的营养琼脂平板上，然后用无菌的玻璃刀把稀释液均匀地涂布在培养基表面上，经恒温培养便可以得到单个菌落。3、平板划线法

简单的分离微生物的方法是平板划线法。用无菌的接种环取培养物少许在平板上进行划线。划线的方法很多，常见的比较容易出现单个菌落的划线方法有斜线法、曲线法、方格法、四格法等。当接种环在培养基表面上往后移动时，接种环上的菌液逐渐稀释，然后在所划的线上分散着单个细胞，经培养，每一个细胞长成一个菌落。

2、富集培养法

富集培养法的方法和原理非常简单。我们可以创造一些条件只让所需的微生物生长，在这些条件下，所需要的微生物能有效地与其他微生物进行竞争，在生长能力方面远远超过其他微生物。所创造的条件包括选择合适的碳源、能源、温度、光、pH、渗透压和氢受体等。在相同的培养基和培养条件下，经过多次重复移种，然后富集的菌株很容易在固体培养基上长出单菌落。如果要分离一些专性寄生菌，就必须把样品接种到相应敏感宿主细胞群体中，使其大量生长。通过多次重复移种便可以得到纯的寄生菌。