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                                                         低温生物***有哪些保藏法？

1、传代培养保藏法：包括又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等，培养后于4-6℃冰箱内保存。

2、液体石蜡覆盖保藏法：液体石蜡覆盖保藏法是传代培养的变相方法，能够适当延长保藏时间。

3、载体保藏法：载体保藏法是将微生物吸附在适当的载体，如土壤、沙子、硅胶、滤纸上，而后进行干燥的保藏法。

4、寄主保藏法：寄主保藏法用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物。

5、冷冻干燥保藏法：先使微生物在极低温度（-70℃左右）下快速冷冻，然后在减压下利用升华现象除去水分（真空干燥），其中真空冷冻干燥法常见。

                                                           低温生物对沙土有什么要求？

1 沙土管制备
将河沙用60目过筛，弃去大颗粒及杂质，再用80目过筛，去掉细沙。用吸铁石吸去铁质，放入容器中用10%盐酸浸泡，如河沙中有机物较多可用20%盐酸浸泡。24小时后倒去盐酸，用水洗泡数次至中性，将沙子烘干或晒干。另取地面下40～60cm非耕作层贫瘠且粘性较小的土，研碎，100目过筛,水洗至中性，烘干。将处理后的沙、土按质量比2∶1混合。混匀的沙土分装入安瓿管或小试管中，高度为1cm左右，塞好棉塞，121℃湿热灭菌30min。随机抽取灭菌后的砂土管若干支，无菌条件下取少许砂土至营养肉汁培养基中，30℃培养24小时，检查无微生物生长后方可使用。
      2 斜面培养物的制备
      参照定期移植法。
      3 制备菌悬液
     向培养好的斜面培养物中注入3～5mL无菌水，洗下细胞或孢子制成菌悬液。用无菌吸管吸取菌悬液，均匀滴入沙土管中，每管0.2～0.5mL。霉菌可直接挑取孢子拌入沙土管中。
      4 干燥
真空抽去沙土管中水分。
      5 保藏
      将沙土管用火焰熔封后存放于低温(4～6℃)干燥处保藏，每隔半年检查一次存活性及纯度。或将沙土管直接用牛皮纸或塑料纸包好，置干燥器内保存。
保藏时间2～10年。
     6 ***培养
     无菌条件下打开沙土管，取部分沙土粒于适宜的斜面培养基上，长出菌落后再转接一次。或取沙土粒于适宜的液体培养基中，增殖培养后再转接斜面。

低温生物的复壮措施

① 纯种分离。采用平板划线分离法、稀释平板法或涂布法均可。把仍保持原有典型优良性状的单细胞分离出来，经扩大培养***原菌株的典型优良性状，若能进行性能测定则更好。还可用显微镜操纵器将生长良好的单细胞或单孢子分离出来，经培养***原菌株性状。

② 通过寄主体内生长进行复壮(如Bacillus thuringiensis的复壮)。主要是对一些寄生性的菌株，可以将衰的菌株接种到相应的宿主体内，提高其寄生性能及其它性能。

③ 淘汰已衰的个体(采用比较激烈的理化条件进行处理，以杀生命力较差的已衰个体)。可以采用各种外界不良理化条件,使发生衰的个体死去,从而留下群体中生长健壮的个体.如:对'5406'抗生菌的分生孢子进行-30-10度的低温处理5-7天,使80%死去,在抗低温个体中可找到健壮的个体.

④ 采用有效的保藏方法。